Тести для ідентифікації патогенних і умовно-патогенних мікроорганізмів

Тести для ідентифікації патогенних і умовно-патогенних мікроорганізмів

Стафілококи Морфологічно Staphylococcus- коки, розташовані у вигляді характерних «виноградних грон». Патогенні стафілококи на кров'яному агарі утворюють колонії діаметром 2-3 мм, оточені прозорою зоною гемолізу; на молочно або желточно-сольовому агарі - колонії, оточені зоною просвітління (протеолітична активність) і райдужним віночком (наявність фермента- лецітовітеллази).

З підозрілих колоній роблять висів на скошений мясопептонний агар для виділення чистої культури. Після 24 ч інкубації при температурі 37 ° С перевіряється плазмо коагулирующая активність культури посівом в пробірки з 0,5 мл цитратной плазми (людської або кролячої) в розведенні 1: 4. Патогенні стафілококи коагулюють плазму протягом 2-24 ч в умовах термостата. Облік виробляють через 1, 2, 4 і потім 24 ч за освітою невеликого желеобразного згустку на дні пробірки. Виділені стафілококи піддаються фаготіпірованію при необхідності встановлення джерела виникнення стафілококової інфекції та шляхів поширення.

Стрептококи Один з представників - Str.viridans (зеленящий стрептокок) - постійний непатогенних мешканець зіву. На кров'яному агарі Streptococcus утворюють дрібні (точкові) сіруваті колонії з прозорою зоною гемолізу (Р ~ гемолитические) і колонії з зеленувато-бурим ореолом і підвищеною прозорістю середовища (а-зеленящий). На кров'яному агарі нерідко зростання стрептококів пригнічується швидкозростаючою іншою мікрофлорою повітря. Тому облік краще вести на чашках з елективних середовищами - Гарро і Туржецкого, в які для придушення супутньої флори додається генціан фіолетовий, що володіє бактеріостатичними властивостями в відношенні сапрофитов повітря. Культивування проводять при 37 ° С. Після підрахунку колоній, що виросли з підозрілих на стрептококи роблять мазки (стрептококи розташовуються короткими ланцюжками або скупченнями) і потім пересівають на кров'яний агар або в цукровий бульйон. У бульйоні стрептококи утворюють ланцюжки, в чому необхідно переконатися за допомогою мікроскопії мазків, приготовлених з характерного придонного осаду (у вигляді пластівців або крихт на дні пробірки при прозорому бульйоні).

Дослідним шляхом встановлено наступна залежність: якщо в 2-х чашках після експозиції в 20 хв розвинулося 2 колонії, то повітря вважають чистим, якщо 3-4- слабо забрудненим. У класах після занять дослідниками вловлювалося до 50000 клітин зеленящего стрептокока в 1м3.

Escherichia coli Колонії із середовища Ендо пересівають в лактозна бульйон з борною кислотою або в жовчно-лактозна середу з діамантовим зеленим, попередньо нагріті до температури 43-44 ° С (на водяній бані), і відразу після засіву теплі пробірки поміщають в термостат при температурі 43 ° С на 24 ч. Борна кислота і діамантовий зелений, що додаються в середовища, є інгібіторами супутньої флори. Поява газоутворення свідчить про присутність Е. coli в досліджуваній воді. Якщо немає можливості зробити посів в лактозна бульйон з борною кислотою, то ідентифікацію Е. coli проводять за двома ознаками: ферментація лактози при температурі 44,5 ° С протягом 24 ч і здатності утворювати індол. В цьому випадку підозрілі на Е. coli колонії засівають паралельно в 2 пробірки: одну з напіврідкої середовищем з лактозою, другу - з середовищем для визначення індолу (бульйон Хоттингера, пептонна вода або інше середовище, що містить триптофан), під пробку пробірки вставляють індикаторну папірець на індол і інкубують при температурі 44,5 ° С. Посівом в пробірки з середовищем ФКП-1 ідентифікація спрощується, так як в цьому середовищі містяться лактоза і триптофан. Позитивна відповідь дається при утворенні газу (розкладання лактози) і індолу (ферментація триптофану).

Тест Грегерсена Цим тестом можна замінити забарвлення по Граму. У краплі 3% -ного водного розчину КОН на предметному склі емульгують бактерійних масу, взяту з щільною середовища. Через кілька секунд після перемішування за петлею тягнуться слизові нитки, що вказує на приналежність досліджуваної колонії до грамнегативних увазі. Грам (+) бактерії слизові нитки не утворюють.

Каталазного тест Наносять 1-2 краплі 3% перекису водню безпосередньо на досліджувану колонію. Поява бульбашок свідчить про виділення бактеріями каталази.

Оксидазний тест Тест проводять з колоніями мікроорганізмів, що виросли на середовищі Ендо. Частина підозрілих колоній стерильною петлею переносять на фільтрувальний папір, просочену реактивом: диметил-п-енілендіаміном і а-нафтолом. Якщо мікроорганізми, які виросли на фільтрі, виділяють оксидазу, колір колонії через 2-5 хв змінюється на синьо-фіолетовий. Такі колонії не враховують при аналізі води. Можна на фільтрувальну папір з індикатором накладати весь фільтр з виросли на ньому колоніями. Колонії БГКП темно- червоного кольору не змінюють свого забарвлення (так як кишкові палички оксідазоотріцательни) і враховуються як представники фекального забруднення води.

У сумнівних випадках - при наявності колоній рожевих або безбарвних (лактозоотріцательних), що не володіють оксидазної активністю, додатково визначають здатність бактерій ферментувати глюкозу при температурі 37 ° С і проявляти протеолітичну активність на середовищі Ендо з молоком. Колонії враховують як БГКП, якщо вони утворені грамоотріцательнимі паличками, ферментують глюкозу до кислоти і газу і не володіють протеолітичної активністю.

Список рекомендованої літератури

1. Мудрецова-Вісс К.А., Кудряшова А.А., Дедюхина В.П. Мікробіологія, санітарія і гігієна: навч. для вузів. -7-е изд. - М .: ВД «Ділова література», 2001. - 388 с.

2. Санітарна мікробіологія / Н.В. Білетова, Р.П. Корнелаева, Л.Г. Кострикіна і ін. Під ред. С.Я. Любашенко. - М.: Піщ.пр-сть, 1980.-352 с.

3. Мармузова Л.В. Основи мікробіології, санітарії та гігієни в харчовій промисловості. - М .: ІРПО, Академія, 2000. - 132 с.

4. Фомін Г.С. Вода. Контроль хімічної, бактеріальної та радіаційної безпеки за міжнародними стандартами: енциклопедичний довідник. - 3-е изд., Перераб. і доп. - М .: Изд-во «Протектор», 2000. - 848 с.

5. Основи мікробіології, вірусології та імунології. Під ред. А.А.Воробьева, Ю.С.Крівошеіна. - М .: Майстерність, Висш.шк., 2001.-224 с.

6. Санітарна мікробіологія і вірусологія / З.М. Кочемасова, С.А. Єфремова, AM Рибакова - М .: Медицина, 1987. - 352 с.

7. Санітарно-мікробіологічний аналіз питної води: методичні вказівки. - М .: Федеральний центр держсанепіднагляду МОЗ Росії, 2001. - 42 с.

8. Визначник бактерій Берджи. У 2-х т .: Пер.с англ. / Под ред. Дж. Хоулт і ін. - М .: Мир, 1997.

9. Методи загальної бактеріології: У 3-х т Пер. з англ. / Под ред. Ф. Герхардта і ін. - М .: Мир, 1983.

Додати коментар

Вашу адресу електронної пошти не буде опублікований. Обов'язкові поля позначені *