Санітарно-мікробіологічний контроль води

Цілі і завдання санітарно-мікробіологічного дослідження води. Оскільки вода використовується при виробництві будь-якого виду продукції, а також безпосередньо в їжу, відповідність її якості санітарно мікробівологіческой показниками надзвичайно важливо. Водним шляхом можуть передаватися кишкові інфекції - холера, черевний тиф і паратифи, сальмонельоз, дизентерія, гепатит А, поліомієліт, а також лептоспірози, сибірська виразка, туляремія, туберкульоз, сап, Ку-лихоманка, різні грибкові захворювання. У зв'язку з цим основною метою санітарно мікробіологічного дослідження води є визначення наявності в воді патогенної і умовно-патогенної мікрофлори, і, отже, джерела цього попадання, а також попередження поширення інфекційних захворювань серед населення.
Санітарно-мікробіологічне дослідження води проводиться в наступних випадках:

1) при виборі джерела централізованого господарсько питного водопостачання та періодичному контролі цього джерела;

2) при контролі ефективності знезараження питної води централізованого водопостачання;

3) при спостереженні за підземними джерелами централізованого водопостачання, за такими як артезіанські свердловини, грунтові води і т. д .;

4) при визначенні стану і ступеня придатності води джерел індивідуального водокористування (колодязів, джерел і т.д.);

5) при спостереженні за санітарно-епідеміологічним станом води відкритих водойм: водосховищ, ставків, озер, річок;

6) при контролі ефективності знезараження води плавальних басейнів;

7) при перевірці якості і ступеня очищення стічних вод;

8) при визначенні вогнища водних спалахів інфекційних хвороб.

до сих пір впорядковано но-мікробіологічні дослідження води регламентуються відповідною НТД (табл.2 ).

Таблиця 2
Перелік нормативно-технічної документації по санітарно мікробіологічному контролю води


назви документів

НТД

1

2

Джерела централізованого господарсько-питного водопостачання. Гігієнічні, технічні вимоги та правила вибору

ГОСТ 2761-84

Вода питна. Методи санітарно бактеріологіческого аналізу

ГОСТ 18963-73

Охорона природи. Гідросфера. Гігієнічні вимоги до зон рекреації водних об'єктів

ГОСТ 17.1.5.02- 80

Охорона природи. Гідросфера. Правила контролю якості морських вод

ГОСТ 17.1.3.08- 82

Вода питна. Польові методи санітарно мікробіологічного аналізу

ГОСТ 24849-81

Вода питна. Відбір проб (Російський державний стандарт)

Р51ХХХ-00

Вимоги до якості води нецентралізованого водопостачання. Санітарна охорона джерел

СанПиН 2.1.4.544-96

Продовження таблиці 2


1

2

Питна вода. Гігієнічні вимоги до якості води централізованих систем питного водопостачання. Контроль якості

СанПиН 2.1.4.559-96

Санітарно-мікробіологічний аналіз питної води (4.2. Методи контролю. Біологічні і мікробіологічні фактори.). М .: МОЗ Рossii

МУК 4.2.1018-01

При санітарно-мікробіологічному дослідженні води визначаються різні показники в залежності від поставленого завдання і характеру досліджуваного об'єкта (табл. 3)
Таблиця 3


об'єкти дослідження

обов'язкові дослідження

додатково рекомендовані

1

2

3

Вода питна централізованого господарсько-питного водопостачання

Число колоній

сапрофитов

БГКП

Е. співпрацюli

Вода питна при нецентралізованому використанні місцевих джерел

БГКП

Вода підземних джерел

централізованого

водопостачання

Число колоній

сапрофитов

БГКП

кишкова паличка

Вода поверхневих джерел централізованого господарсько-питного водопостачання в межах населених пунктів

ЛКП

Число колоній

сапрофитов

Е.соE; Entyerokoкк

і; Коліфаїх

паралічьмонелли;Ши

Гелла;

ентеровірус


Продовження таблиці 3


1

2

3

Вода в водних об'єктах в рекреації

лкп
Число колоній

сапрофитов

Е. співпрацюli, ентерококи

Kolifagi,

стафілококи

Сальмонеллы,

Shigella

ентеровірус

Вода купальні-плавальниьних і

спортивних басейнів з прісною і морською водою

БГКП

Число колоній

сапрофитов

стафілококи

ентеровірус кишкова паличка

Хо зяйственная -бутиові стічні води після очищення і знезараження

ЛКП

Сальмонеллы

Shigella

ентеровірус

Методи санітарно-мікробіологічного дослідження води

Відбір проб води Важливим правилом є дотримання стерильності: забір води
Достовірність отриманих результатів і висновків залежать від правильності забору проб. Вода для санітарно-бактеріологічного аналізу забирається в обсязі 0,5 л в скляні бутлі або флакони, закриті ватно-марлевими пробками і зав'язані зверху паперовими ковпачками. При необхідності дослідження води на присутність збудників кишкових інфекцій кількість води збільшують до 2,5 л.

для взяття проб води з глибини (відкритих водойм, колодязів, басейнів і т. д.) використовують спеціальні прилади: батометр, прилади Ісаченко, Рутнер і ін. батометр являє собою металевий каркас довжиною 0,5-1 м (рис.6). Каркас виготовляється з металу, що не піддається корозії, і може компактно складатися, так як складається з окремих кілець. Дно каркаса свинцеве і служить грузилом. Всередину встановлюють стерильну бутель, закриту стерильною гумовою або корковою пробкою з кільцем, до якого прив'язана мотузка. При зануренні у воду на необхідну глибину, потягуючи за мотузку, пробку відкривають, посудину заповнюється водою, про що свідчить припинення появи пухирців повітря на поверхні води. Мотузку опускають, бутель автоматично закривається. Після вилучення батометра притерту пробку замінюють стерильною ватною (яка повинна бути загорнута в папір і перебувати в комплекті з батометром).

Для взяття проб з великої глибини (понад 30 м) можна використовувати прилади Ісаченко, Рутнер, Романенко-Младова.

При відсутності батометрів пробу води можна відбирати за допомогою бутлі, в пробку якої монтують дві скляні трубки, з'єднані гумовим шлангом. Одна трубка довга і доходить до дна бутлі, інша -коротке. До гумовому шлангу прив'язують мотузку. Бутель на тросі опускають у водойму і на заданій глибині, смикнувши за мотузку, знімають гумову перемичку з скляних трубок, вода починає надходити в довгу трубку, а через коротку виходить повітря. Після відбору проби, бутель виймають з водойми, тут же закривають ватяними пробками отвори скляних трубок і відправляють на исследование.

Для взяття проб питної води використовують склянки ємністю 0,5-1 л. При взятті проб води з кранів, їх попередньо обпалюють полум'ям ватним тампоном, змоченим спиртом, потім повністю відкривають і протягом 10 хв воду спускають. Воду наливають у бутлі з дотриманням стерильності, що не змочуючи шийку, щоб не допустити замочування пробки. Джерельну воду беруть безпосередньо з струменя або з середини поточного джерела, на відстані 10- 15 см від поверхні і дна. Артезіанську і колодязну воду забирають на глибині 10-15 см від поверхні води. З ополонки проби відбирають на глибині 10-15 см від нижнього краю льоду. З відкритих водойм, як правило, беруть серію проб на різній відстані від берега на різній глибині з урахуванням місця водозабору і руху води.

Лід, що використовується на харчових підприємствах і в сховищах, також піддається санітарно-мікробіологічному дослідженню. Для аналізу беруть шматок льоду не менше 2 кг, в лабораторії його обмивають стерильною водою і стерильними інструментами з глибини вирубують кілька шматочків так, щоб загальна маса була близько 500 р Лід поміщають в стерильний посуд і залишають при кімнатній температурі, після растаіванія досліджують як воду .

Проби стічних вод також забирають в стерильні бутлі. Однак обсяг кожної проби може коливатися від 500 до 10 мл залежно від місця узяття (при перевірці окремих етапів очищення, після обробки, перед скиданням у водойму) і від завдань аналізу.

Зберігання та транспортування проб води

Всі взяті для дослідження проби води пронумеровуються, в супровідному документі має бути зазначено: найменування водойми, вододжерела, його місцезнаходженняе; опис місця відбору проб (для водойм - відстань від берега і глибина), близькість джерел забруднення, швидкість течії, метеорологічні умови - температура води, повітря, наявність опадів, вітру, хвиль і т. д .; дата взяття проби (годину, число, місяць, рік), мета дослідження. Супровідний документ підписується особою, яка брала пробу, із зазначенням його посади.

Транспортувати воду слід в сумках-холодильниках або в ящиках з термоизолирующей прокладкою (температура в яких не більше 1-2 ° С), захищати від різких поштовхів (щоб не замочити пробки), замерзання, дії сонячних променів.

Дослідження води повинно бути проведено не пізніше 2 ч з моменту відбору проби, _лішь як виняток допускається зберігання проби до 6 ч при температурі 4-5 ° С. При більш тривалому і неправильному зберіганні може наступити розмноження або загибель мікрофлори.

Доставлені проби води реєструють в спеціальному журналі з пронумерованими і прошитими сторінками.

Визначення числа сапрофітних мікроорганізмів

До сапрофітним мікроорганізмам, що населяють водойми, відносяться мезофільні аероби і факультативні анаероби, здатні на живильному середовищі утворювати колонії, видимі при збільшенні в 2-5 раз. Кількість мікроорганізмів, що виростають у вигляді колоній, відповідає ступеню забруднення води органічними речовинами, що характеризує стан води. Тому загальна кількість сапрофітних бактерій слід розглядати як суттєвий непрямий показник санітарного стану води.

Визначення загального мікробного числа води можна проводити методом серійних десятикратних розведень з посівом на мясопептонний агар (МПА) і методом прямого мікроскопічного підрахунку мікроорганізмів в досліджуваній воде.

При визначенні першим методом посіви вирощують в залежності від мети дослідження при температурі 37 ° С протягом 24 ч, або при 20-22 ° С -48 ч, або при обох температурних режимах паралельно. Наприклад, при виборі нового джерела водопостачання визначають дві групи сапрофітів: 1) виростають при температурі 20-22 ° С протягом 48 ч, 2) виростають при 37 ° С протягом 24 ч. При температурі 20 ° С виростає більшу кількість сапрофітів і саме вони є найбільш активними учасниками процесу самоочищення водойми. У місцях великого забруднення стічними водами чисельне значення обох груп сапрофитов близько, тому динаміка чисельності цього показника вважається чутливим індикатором забруднення водойм, особливо органічними речовинами. При визначенні числа сапрофітів при двох температурних режимах роблять паралельно кожен посів на 2 чашки Петрі із середовищем (в двох повторностях). Обсяг води для посіву вибирають з таким розрахунком, щоб на чашках виросло не менш 20, але не більше 300 колоній (табл. 4). Перед посівом проби ретельно перемішують, потім готують 10-кратні розведення (при сильному забрудненні). Засів кожного разведенія- в кількості 1 мл глибинним способом.

Після інкубації (при 20 і 37 ° С) підраховують всі колонії, які виросли як на поверхні середовища, так і в глибині її. При прямому підрахунку зі зворотного боку дна чашки
олівцем по склу відзначають кожну нараховану колонію (щоб не врахувати її двічі).
Таблиця 4

Обсяг засеваемой води (в мілілітрах)

Об'єкт

для визначення

дослідження

сапрофитов

БГКП, ЛКП, кишкова паличка

entyerokokkov

1

2

3

4

Вода питна

1; ОД

200; 133 або

500 або 333

централізованого водопостачання

300

100, 30, 3

Водні об'єкти, що не

1; ОП або 1;

40, 10, 1

50, 10

забруднюючих

OF; 0,01

стічними водами

Водні об'єкти,

1; ОД; 0,01 або

10; 1; ОП або

10, 1, 0,1

забруднені

OF; 01; 0,001

1; OF; 0,01

стічними водами

Стічні води до

Так як 0,001 до

Від 0,01 до

Від ОА

очищення та

0,000 001

0,000001 або

0,0001 або від

знезараження

від 0,001 до 0,000001

0,01 до 0,000001

Стічні води після

Від 0,01 до

Від 1 до 0,00001

Від 1 до

очищення

0,00001

або від 1 до 0,0001

0,00001


Якщо на агарі в чашках виросло багато колоній (більш 300) або вони розпливчасті, а аналіз не можна повторити, то підрахунок можна вести за допомогою спеціальних камер або приладу для рахунку колоній (рис 7). Цей прилад значно полегшує підрахунок, так як він ведеться за допомогою лупи, що дає збільшення колоній в 2 рази, що прискорює роботу і спрощує процес визначення кількості колоній. Апарат складається з металевого корпусу, на верхній частині якого знаходиться кругла пластинка з термостійкого матового скла з нанесеною на ньому сіткою. Під склом вмонтована

Підрахунок колоній ведеться за допомогою електроперо авторучки, з'єднаної з автоматичним лічильником. При кожному натисканні на ручку (в момент нанесення на зворотному боці дна чашки точки пером в місці знаходження колоній) при Електроконтакт на автоматичний лічильник надходить імпульс, що реєструється появою чергової цифри на табло лічильника.

Кінцевий результат - ОМЧ - розраховують за формулою:

omch- ^ (3)

V

де ОМЧ - загальне мікробне число, колонійобразующіх одиниць (КУО) мікроорганізмів в 1 мл досліджуваної води;

К-кількість колоній на чашці Петрі;

Р- фактор розведення;

V- обсяг, засівають на чашку, мл.
електрична лампочка, яка висвітлює сітку. Чашка з посівом, вміщена на скло, знизу підсвічується.

Обчислюють середнєарифметичну величину для кожного розведення (при засіву на 2 і більш чашки Петрі паралельно). Якщо колоній зросла так багато, що вони не піддаються рахунку, або спостерігається зростання розпливчастих колоній по всій поверхні агару, то в результаті відзначають «суцільний повзуче зростання».

Прямий мікроскопічний метод визначення загальної кількості мікроорганізмів

Цей метод вперше був запропонований в 1932 р А.З. Разумова. Суть методу полягає в концентрації бактерій на мембранних фільтрах (при пропущенні через них досліджуваної води), подальшому фарбуванні еритрозином і мікроскопірованіі.

Прямий метод зручний тим, що результат, т. Е. Кількість мікроорганізмів в 1 мл води, може бути отриманий протягом декількох годин. Тому рекомендується використовувати прямий метод, якщо необхідно дати швидку санітарну оцінку води: при оцінці процесу природного самоочищення водойм, при оцінці ефективності роботи очисних споруд на всіх етапах і т.д. Для фільтрування води використовують мембранні фільтри, фільтр Зейтца (ріс.8) або спеціальний апарат Долгова- Разумова. Мембранні фільтри - тонкі (0, 1-0,5 мм) круглі пластинки з нітроклітковини або ацетилцелюлози діаметром 35 мм. Залежно від розміру пір розрізняють фільтри марки Ф (фільтруючі): № 1 - 350 нм; № 2 - 500nm; № 3 - 700 нм; № 4 -900нм; №5 -1200 нм.

Потім мембранний фільтр з пофарбованими мікроорганізмами висушують і поміщають на предметне скло, попередньо капнув краплю иммерсионного масла на скло і на фільтр, який накривають тонким покривним склом. Мікроскопують з іммерсійним об'єктивом, в окуляр вкладають сітчастий мікрометр, розділений на дрібні квадрати. Підраховують мікроорганізми в 20 полях зору (в кожному полі зору в 4 маленьких квадратах, розташованих по діагоналі). Розрахунок загальної кількості бактерій в 1 мл. (X) ведеться по формуле:


X = S-N-10', (4)

s,v

де S-фільтр площа приладу (мм2); 10б - перекладної коефіцієнт квадратних міліметрів в квадратні мікрометри;

N - середня кількість бактерій в одному квадраті; S] - площа квадрата окулярного мікрометра (мкм2); V- обсяг профільтрованої води (мл).

Визначення бактерій групи кишкових паличок

Поняття «Бактерії групи кишкових паличок» включає різних представників сімейства Enterobacteriaceae: пологів Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella та ін. За нормативної документації до БГКП відносяться грамнегативні, не утворюють спор палички, що не володіють оксидазної активністю, ферментують лактозу з утворенням кислоти і газу при температурі 37 ° С протягом 5-24 ч (додаток 3, табл. 3.1). За міжнародною класифікацією такі мікроорганізми відносять до загальним коліформні бактеріям (ОКБ). Вони потрапляють в навколишнє середовище, в тому числі і в воду, з випорожненнями людини і тварин, тому виявлення їх свідчить про фекального забруднення і епідемічної небезпеки щодо кишкових інфекцій.

БГКП (ОКБ) можна визначати двома способами: шляхом мембранних фільтрів і титраційна (бродильним) методом.

Дослідження води методом мембранних фільтрів. Метод заснований на фільтрації встановленого обсягу води через мембранні фільтри, вирощуванні посівів на диференційно-діагностичної середовищі і подальшої ідентифікації колоній по культуральними та біохімічними ознаками.

Перед вживанням мембранні фільтри перевіряють на відсутність тріщин, отворів, міхурів і кип'ятять в дистильованої воді протягом 10 хв (при цьому не можна допускати скручування фільтрів). Для повного видалення з фільтрів залишків розчинників, які застосовуються при їх виготовленні, кип'ятіння слід повторити 3-5 раз зі зміною дистильованої води. Підготовлені таким чином фільтри зберігаються в банках з дистильованою водою або в сухому вигляді. У день постановки досвіду фільтри повторно стерилізують кип'ятінням в дистильованої воді протягом 10 хв.

Фільтрування проводять за допомогою спеціальних приладів або фільтра Зейтца ). Перед посівом води апарат стерилізують фламбирования. Після охолодження на фільтрувальний столик, на якому розташована сітка, стерильним пінцетом поміщають мембранний фільтр, притискують його лійкою або металевим циліндром і щільно закріплюють спеціальними гвинтами. Відросток колби, в яку фільтрується вода, за допомогою гумової трубки з'єднують з водоструминним або масляним насосом для створення вакууму в приймальному посудині (близько 0,25 атм).

Обсяг води для посіву вибирають з урахуванням таблиці 4, він повинен бути таким, щоб на фільтрі виросло не більше 30 ізольованих колоній. Рекомендований обсяг питної води - 300мл. Досліджувану воду кожного обсягу фільтрують не менше ніж через 2 фільтра.

У воронку або стакан наливають необхідні обсяги води, починаючи з менших, а потім великі, щоразу змінюючи фільтри. Найменший обсяг води - 1 мл - слід фільтрувати через фільтр, попередньо змочений стерильною водою. Після фільтрування верхню частину приладу знімають і фільтр обережно (при збереженні вакууму для видалення надлишку вологи на фільтрі) стерильним пінцетом переносять на середовище Ендо в чашку Петрі. Фільтр накладають вгору поверхнею, на якій осіли бактерії, уникаючи появи бульбашок повітря між фільтром і середовищем. На одну чашку можна розмістити 4 фільтра, під кожним на дні чашки слід надписати обсяг води, номер проби і число. Якщо вода каламутна, то фільтрування ведеться відразу через два фільтри: попередній фільтр № 6 (для затримання великих часток) поміщають на фільтр № 2. Після фільтрування обидва фільтра переносять на середовище Ендо. Чашки з фільтрами поміщають в термостат та інкубують при температурі 37 ° З протягом 24 ч. При остаточному результаті враховують колонії, що виросли на обох фільтрах.

При наявності у воді БГКП (ОКБ) на фільтрах з'являється зростання типових для цих бактерій колоній: темно-червоні з металевим блиском або червоні, рожеві з червоним центром, що мають чіткий відбиток на зворотному боці фільтра. Бактерії з таких колоній забарвлюють по Граму і микроскопируют. Забарвлення за Грамом можна замінити на тест Грегерсена (додаток 3). З культурою грамнегативнихбактерій лактозополо-тивних колоній ставлять оксидазний тест (додаток 3) для диференціації бактерій родини ентеробактерій з Pseudomonadaceae (останні є оксідазообразующімі бактеріями). Частину оксідазоотріцательной Гр (-) ізольованою колонії засівають в пробірку з напіврідкої лактозной середовищем і інкубують при 37 ° С, 48 ч. При появі кислоти і газу за більш короткий проміжок часу, результат вважають позитивним.

Індекс ОКБ (БГКП) розраховують за формулою:

К • 1000 (5)
індекс = --------
V

де К-кількість перевірених на приналежність до ОКБ (БГКП) колоній на фільтрах;

V- обсяг профільтрованої води через фільтри, на яких вівся облік.

Наприклад, профільтровано по 100 мл в трьох повторностях, на одному фільтрі виросло 5 колоній, на іншому - 2, на третьому - немає зростання.

Індекс ОКБ буде дорівнює: [(5 + khYuOO]: 300 = 23 КУО (доолонійобразующіх одиниць). Для перекладу індексу в титр використовують формулу (1), для розглянутого випадку: Титр =1000: 23 43 =, 5мл. Відповідно до ГОСТ, у води питної

індекс ОКБ повинен бути не більше 3, у води плавального басейну - не більше 10.

Метод мембранних фільтрів є сучасним, точним, менш трудомістким і більш дешевим в порівнянні з титраційна методом. Він зручний і тим, що дозволяє концентрувати бактерії, що містяться в значних обсягах води на невеликій поверхні фільтра. Однак одним з найбільш істотних недоліків методу є те, що цим методом виявляється менша кількість бактерій в порівнянні з титраційна. Для більшої точності рекомендується дослідження води проводити паралельно обома методами.

Тітраціонний метод дослідження води. Метод заснований на накопиченні бактерій після посіву встановленого обсягу води в рідку живильне середовище, з подальшим пересівом на диференційно-діагностичне середовище та ідентифікації колоній по культуральними та біохімічними тестами.

Обсяг засеваемой води залежить від характеру досліджуваного об'єкта, але обов'язково посів ведеться в 2-3, а в деяких випадках-в 5-ти povtornostyah.

Обсяги води вибирають з таким розрахунком, щоб в одному з розведенні отримати хоча б один негативний результат. (тастос 5).

Таблиця 5

Схема посіву води з різних об'єктів при роботі титраційна методом

Об'єкт дослідження

Обсяги засеваемой води (в мл) для визначення

БГКП, ліс, кишкова паличка

entyerokokkov

Вода питна

централізованого

водопостачання

3 повторності по 100, 10,1

2 або 3 повторності по 100, 10, 1

Вода нецентралізованого водопостачання і плавальних басейнів

50, 5 повторностей по 10, 1 або 2 повторності по 100, 10, 1 і 0,1

2 або 3 повторності по 100, 10, 1

Водні об'єкти, що не забруднює стічними водами

50, 5 повторностей по 10, 1 або 2-3 повторності по 10; 1; 0,1; 0,01

50,5

повторностей по 10, 1 або 2-3 повторності по 10; 1; 0,1; 0,001

Продовження таблиці 5

Водойми, що забруднюють стічними водами

2-3 повторності по 1; ОД; 0,01; 0,001 або 1; 0,1; 0,01; 0,001; 0,0001; 0,00001

2-3 повторності по

10; 1; 0,1; 0,01

Стічні води до очищення і знезараження

Так як 0,01 0,000000001 до

Так як 0,1 0,00000001 до

Стічні води після очищення і знезараження

Від 0,1 до 0,00000001

Так як 0,1 0,000001 до

Посів води проводиться в глкжозопептонную середу (ГPS): 100 мл води - в 10 мл концентрованої середовища, 50 мл - в 15 мл концентрованої середовища, 10 мл - в 1 мл також концентрованої середовища; 1 мл і наступні розведення - в 10 мл глюкозопептонной середовища нормальної концентрації. Великі обсяги води засіваються у флакони або колби, менші - в пробірки. Посіви інкубують в термостаті протягом доби при температурі 37 ° С.

З пробірок з посівами, в яких спостерігається помутніння (а також утворення кислоти і газу), роблять висів на сектора в чашки з середовищем Ендо. Посіви витримують в термостаті при температурі 37 ° С протягом 16-18 ч. При наявності на середовищі Ендо характерних для БГКП (ОКБ) колоній (червоних з металевим блиском) слід провести всі тести, перераховані вище. Позитивна відповідь на наявність БГКП дається в тому випадку, якщо спостерігається зростання характерних колоній, утворених оксідазоотріцательнимі, Гр (-) бактеріями, сбраживающих лактозу при 37 ° С з утворенням кислоти і газу. Звертають увагу також на відбиток, забарвлений в червоний колір, на середовищі після зняття досліджуваної колонії. Таким чином, позитивну відповідь видається через 40-42 ч. Так само, як і при визначенні БГКП методом мембранних фільтрів, якщо на середовищі Ендо виросли лактозоотріцательние колонії (рожеві, безбарвні, дрібні червоні), то їх приналежність до БГКП (ОКБ) підтверджується негативним забарвленням по Граму, негативним Оксидазний тестом , здатністю ферментувати лактозу до кислоти і газу при температурі 37 ° С і відсутністю протеолітичної активності (при посіві на середу Ендо з молоком).

Результат виражається у вигляді індексу (титру) БГКП або ОКБ, цифрове вираз яких визначають по таблиці 6.

Таблиця 6

Розрахунок найбільш ймовірного числа бактерій в 1л води

Число позитивних результатів з 3 обсягів

Число позитивних результатів з 3 обсягів

ё

[—1 М

[—1 м

§

[—1 м

[—1 м

по

по

по

О

О

по

по

по

О

О

100ml

10

1 мл

і та

100ml

10

1 мл

і та

$

мл

§

мл

§

в

0

0

0

<3

> 333

3

0

0

23

43

0

0

1

3

333

3

0

1

39

26

0

1

0

3

333

3

0

2

64

16

1

0

0

4

250

3

1

0

43

23

1

0

1

7

143

3

1

1

75

13

1

1

1

11

91

3

1

2

120

8

1

2

0

11

91

3

2

0

93

11

2

0

0

9

111

3

2

1

150

7

2

0

1

14

72

3

2

2

210

5

2

1

0

15

67

3

3

0

240

4

2

1

1

20

50

3

3

1

460

2

2

2

0

21

48

3

3

2

1100

0,9

2

2

1

28

86

3

3

3

> 1100

<0,9

Визначення термотолерантних коліформних бактерій (ТКБ)

З усіх бактерій, що входять до складу БГКП, найбільше санітарно-показове значення мають мікроорганізми роду Escherichia. За здатністю розщеплювати лактозу при температурі 37 ° С з БГКП (ОКБ) прийнято виділяти Гр (-) бактерії, які здатні ферментувати лактозу при температурі 44, 5 ° С. До них відноситься Е. coli, що не росте на

цитратной середовищі. Відповідно до міжнародної класифікації цю групу бактерій називають термотолерантні коліформні бактерії - ТКБ.

Число ТКБ характеризує ступінь фекального забруднення води водних об'єктів і побічно визначає епідемічну небезпеку щодо збудників кишкових інфекцій. ТКБ визначають тими ж методами, як і БГКП (ОКБ), крім останнього етапу ідентифікації, який проводиться по ферментації лактози на полужидкой живильному середовищі при 44, 5 ° С. У разі зростання на середовищі Ендо типових лактозо- позитивних колоній, Гр (-), оксідазоотріцательних, спсобних ферментувати лактозу при 44, 5 ° С, їх враховувати-ють як ТКБ , Індекс або титр визначають по таблиці 6.

Визначення кишкова паличка

Визначення E.coli є додатковим показником для розшифровки походження біологічної контамінації, визначення свіжості фекального забруднення, при оцінці якості води в разі перевищення нормативу. Таке дослідження проводиться при періодичних аналізах води, а також при несподіваних змінах в основних показниках - індексу ОКБ, ТКБ.

Група бактерій, умовно позначаються як E.палички, Включає лактозопозитивні кишкові палички, ферментують лактозу до кислоти і газу при температурі 43-44,5 ° С в присутності інгібіторів сторонньої мікрофлори і утворюють індол при тій же температурі. В основному це бактерії роду етеріхія, Але можуть бути віднесені до цієї групи і представники інших родів, що володіють такими ж властивостями (наприклад, Citrobacter і ін.). Є. coli визначають тими ж методами: мембранних фільтрів, прямого посіву і титраціонм.

Різниця - на етапі дослідження властивостей мікроорганізмів, які виросли на середовищі Ендо. Результат дослідження висловлюють кількістю E.палички в 1 л (Колi-індекс).

Метод прямого посіву застосовується при визначенні E.coli в стічних водах і сильно забрудненій воді водойм. На чашки з середовищем Ендо засівають по 0, 1-0,5 мл проби води (по 4 дози з кожної проби), ретельно втирають шпателем і інкубують протягом 16-18 ч при температурі 37 ° С. Враховують зростання характерних колоній, визначають біохімічні совйства бактерій і визначають колі-індекс, орієнтуючись на таблицьи.

визначення ентерококів

Ентерококи в останні роки привертають до себе увагу як мікроорганізми - показники фекального забруднення. Вони виявляються в навколишньому середовищі, куди потрапляють з випорожненнями людини, тварин, птахів, комах, будучи постійними мешканцями кишечника. У грунті і воді вони зберігаються до 6 тижнів, але не розмножуються і не змінюють свої основні біологічні властивості. Виживання ентерококів в воді наближається до виживання патогенних ентеробактерій. Вони стійкі до підвищення температури (нагрівання до 55-60 ° С витримують протягом 1 ч), добре переносять низьку температуру, мають значну стійкість до хлору. Все це дає право вважати ентерококи другим після кишкової палички санітарно-показовим мікроорганізмом при дослідженні води.

Особливе значення має визначення ентерококів в воді плавальних басейнів як більш стійких до дії знезаражувальних речовин, ніж БГКП.

Визначення ентерококів проводять методом мембранних фільтрів, титраційна, а при великій забрудненості води (понад 30 бактерій в 1 мл) -методом прямого посіву.

Суть методу мембранних фільтрів полягає в концентрації ентерококів з певного обсягу води на мембранних фільтрах з наступним підрощуванням мікробів на спеціальних середовищах, ідентифікації та визначенні індексу ентерококв.

Обсяг води (2-3 десятикратних розведення) вибирають з таким розрахунком, щоб на фільтрах виросло не менш 10 і не більше 50 ізольованих колоній (орієнтуючись по таблиці 8). Фільтри, через які пропускають вибрані обсяги води, поміщають в чашки Петрі на середу сланець або жовчну середу і інкубують при температурі 37 ° С протягом 24 ч. На середовищі сланець виростають характерні колонії: невеликі, опуклі, круглі, темно-вишневі або рожеві з темно- вишневим центром (забарвлення колоній залежить від ступеня відновлення ТТХ). На жовчної середовищі колонії плоскі, великі з рівними краями, білі з кремовим або рожевим відтінком, а також малинові. Малиновий колір характерний для колоній S. faecalis. Належність колоній до ентерококи підтверджується мікроскопією мазків, забарвлених по Граму, і відсутністю каталазной активності (додаток 3).

Підраховують кількість колоній, що виросли і обчислюють число ентерококів в досліджуваній воді виходячи з обсягів води, профільтроване через мембранні фільтри. Загальна кількість колоній ділять на обсяг води і множать на 1000.

Сутність титраційна методу визначення ентерококів полягає в посіві різних обсягів досліджуваної води в рідку елективну середу для накопичення мікроорганізмів з подальшим висівом на щільну молочно-ингибиторную середу для отримання окремих колоній, їх ідентифікації і підрахунку індексу ентерококів. Тітраціонний метод дає більш точні кількісні дані про вміст ентерококів в воді. Обсяги води вибирають з таким розрахунком, щоб при найбільш високому розведенні спостерігався один або кілька негативних результатів (при цьому слід орієнтуватися на таблицю 10). Кожен обсяг або розбавлення досліджуваної води засівають в 2 або 3 повторностях. обсяги води 100 мл і 10 мл засівають в 100 і 10 мл (відповідно) лужно-поліміксіновой середовища подвійної концентрації, 1 мл і по 1 мл десятикратних розведенні засівають в 5 мл цієї ж середовища звичайної концентрації. Витримують в термостаті протягом 24 ч при температурі 37 ° С, потім з усіх колб і пробірок, в яких спостерігається зростання бактерій (помутніння, зміна кольору середовища з синього на зелений або жовтий), роблять висіву на сектора в чашки Петрі з молочно-інгібіторної середовищем. Пробірки з посівами в лужно-поліміксіновую середу, в яких ще немає ознак зростання, залишають на добу в термостаті, і якщо в якихось пробірках з'явився зростання, то також роблять висів на молочно ингибиторную середу. Після 24 ч інкубування в термостаті враховують колонії ас підно-чорніе, опуклі, з металевим блиском (S. faecalis), а також колонії, оточені вузькою зоною просвітління з випаданням по периферії осаду пара-казеїну (S, faecium, .Thou liquefaciens), дрібні сірі колонії (S. faecium, біовар durans). З частини колоній (вибірково) слід приготувати мазки, забарвити за Грамом. Наявність ентерококів дає можливість дати заключний відповідь. Індекс ентерококів визначають по таблиці 5.

При визначенні ентерококів методом прямого посіву (в основному при дослідженні стічних вод) роблять посіви досліджуваної води безпосередньо на чашки Петрі з середовищем сланець або жовчної середовищем в 2 або 5 повторностях. зазвичай беруть 1 мл, 0,5, 0,2 і 0,1 мл з кожного десятикратного розведення. Засівають воду ретельно втирають шпателем в поверхню живильного середовища до повного вбирання води. Ідентифікація та підрахунок ентерококів проводяться так само, як при визначенні титраційна методом.

Визначення спорових сульфаitreducірующїх клостридий

Сульфітредукуючих клостридії (представник цієї групи мікроорганізмів - Clostridium Perfringens) Спороутворюючі анаеробні паличкоподібні мікроорганізми, редуцирующие сульфіт натрію на залізо-сульфитном агарі при температурі 44 ° С протягом 16-18 ч. Метод заснований на вирощуватибии посівів в залізо-сульфитном агарі в умовах, наближених до анаеробних, і підрахунку числа чорних колоній.

Кількісно ці мікроорганізми в воді можна визначити методом мембранної фільтрації або прямим посівом. В якості поживного середовища для виділення і підрахунку сульфітредукуючих клостридий зазвичай використовують середу Вільсона-Блера (жelezosulьfitnиj).

Перед посівом пробу води прогрівають на водяній бані при температурі (75 ± 5) ° С протягом 15 хв для виключення вегетативних форм. При дослідженні хлорованої води, її можна не прогрівати. Застосовуючи метод мембранної фільтрації, пробу води певного обсягу пропускають через фільтр, який потім поміщається в пробірку з підготовленою розплавленої живильним середовищем верхньою стороною всередину (пробірка з живильним середовищем після посіву повинна бути негайно охолоджена в холодній воді, щоб уникнути попадання повітря) або в чашку Петрі на поверхню живильного середовища, яка потім заливається тієї ж живильним середовищем товстим шаром.

Метод прямого посіву передбачає посів у стерильні пробірки 20 мл води наступним чином: по 10мл в 2 пробірки (об'ємом не менше 30 мл), або по 5 мл в 4 пробірки (об'ємом не менше 15 мл).

Зверху посіви води заливають гарячим (75-80 ° С) железосульфітним агаром в кількості, що перевищує обсяг води в 2 рази. Середу заливають по стінці пробірки, намагаючись не допустити утворення бульбашок повітря. Пробірки з посівами швидко охолоджують в склянці з холодною водою, інкубують при 44 ° С протягом 24 ч.

Кількісному обліку підлягають тільки ті посіви, де отримані ізольовані колонії. Підраховують чорні колонії, що виросли як на фільтрі, так і в товщі живильного середовищи. результат аналізу висловлюють числом доолоніеобразующіх одиниць (КУО) sulyfit-redutsiruyushtih суперечка klostridiy в певному обсязі води (підданої аналізу)

визначення бактеріофагів

Присутність бактеріофагів в воді, каже про фекального забруднення, і є індикатором або сигналом про можливу присутність ентеровірУСОв. Тому методи визначення бактеріофагів (в т.ч. і коліфагів) включені в методичні вказівки МОЗ Росії (2001г.) І регламентовані Міжнародними стандартами (ІСО 10705- 1:1995; 10705-2:2000; 10705-3; 10705-4).

Існує кілька методів кількісного і якісного визначення бактеріофагів в воде.

Всі методи засновані на чутливості музейних культур мікроорганізмів і припускають використання наступних тест-організмів (за міжнародними стандартами): мутант Сальмонела tuphimurium, Непатогенних для людини, штам етеріхія coli До-12 Hfr з відповідною колекції культур АТСС 23631 або NTCT12486, штам E.палички роду CN, званий WG5, а також бактеріофаги MS2, NCTC12487 або АТСС 15597 для контролю чутливості тест-організмів.

Міжнародним стандартом регламентуються методи визначення бактріофагов РНК типу F і соматичних бактріофагов, які дозволяють визначити присутність / відсутність бактеріофагів, а також дати їх кількісну оцінку (ІСО 10705-1).

Бактеріофаги РНК типу F - це бактеріальні віруси, здатні інфікувати певний штам господаря за допомогою F-фімбрій або статевих фімбрій. Соматичні бактеріофаги є непатогенними для людини, проте є стійкими до зовнішніх чинників, особливо до висушуванняю.

Прямий метод виявлення бактеріофагів. Даний метод представлений в методичних вказівках МОЗ РФ-МУК 4.2.671-97 і застосовується при визначенні досліджень за епідпоказаннями або в разі необхідності отримання результатів в короткі терміни.

Визначення інсульту. для 18-24 години перед проведенням аналізу необхідно зробити посів тест-культури E.coli К12 F + (Little.птах рух.HH-T мед.І цеол.препаратов ім. J1.A. Тарасевича) на косяк з поживним агаром (МПА). Перед проведенням аналізу зробити змив з косяка 5 мл стерильної водопровідної води і по стандарту мутності приготувати суспензію тест-організму в концентрації 109 Бакта. клітин / мл.

Розплавити і остудити до 45 ° С 2% -ний живильний агар. Досліджувану воду 100 мл внести в 5 стерильних чашок Петрі (по 20 мл в кожну). У живильне середовище додати змив E.coli (з розрахунку 1,5 мл на 150 мл агару) і добре перемішати. Отриманою сумішшю залити по 30 мл спочатку порожню чашку Петрі (контроль), а потім все чашки, що містять досліджувану воду. Вміст чашок перемішують обертальними рухами. Після застигання живильного середовища чашки перевертають догори дном і ставлять для інкубації в термостат при 37 ° С на 18-24 годин.

Облік результатів проводять шляхом підрахунку і підсумовування бляшок, які виросли на 5-ти чашкках Петрі. Резулшьтати висловлюють в бляшкообразующіх одиницях (БОЮ) на 100 мл води.

У контрольній пробі бляшки повинні отсутствовать.

Санітарно-мікробіологічна оцінка води

Оцінка якості води проводиться комплексно: за санітарно-мікробіологічними показниками з урахуванням органолептичних, гельмінтологічних і хімічних даних і регламентується відповідними ГОСТами, санітарними правилами і методичними вказівками. Безумовним показником забрудненості води є виявлення патогенних мікроорганізмів. В цьому випадку вода вважається непридатною для будь-яких цілей.

Критерії оцінки якості води розроблені диференційно в залежності від категорії води і її призначення представлені в таблиці 1.2 (додаток 1).

При оцінці питної води керуються основною вимогою: вона не повинна містити патогенні бактерії і віруси. При санітарно-бактеріологічної оцінці води колодязів виходять з того, щоб в 1 л БГКП містилося не більше 10. Показником фекального забруднення води криниць є виявлення ентерококів. Відсутність знезараження колодязної води, можливість біологічної контамінації (опади, просочування забруднених зливових і грунтових вод і т.д.) роблять її епідемічно небезпечною, і тому потрібен постійний контроль. При виявленні у воді ентерококів вода вважається непридатною до вживання, і колодязь підлягає очистке.

Якщо при виборі нового джерела водокористування кіль- індекс води водойми перевищує 10000 в 1 л, то проводиться додаткове дослідження на присутність Е. coli і ентерококів як показників свіжого фекального забруднення і безпосереднє виявлення патогенних бактерій сальмонел і шигел.

при індексі Е. coli, ентерококів більш 1000 в 1 л вода водойми розцінюється як забруднена, причому контамінація вважається свіжою, а вода -небезпека в епідемічному відношенні. В останні роки розроблено та запропоновано [Григор'єва Л. В., 1975] додаткові критерії оцінки санітарного стану водойм, в які включені показники титру ентерококів, перфрингенс-титр і індекс бактеріофагів.

Додати коментар

Вашу адресу електронної пошти не буде опублікований. Обов'язкові поля позначені *