Санітарно-мікробіологічний контроль повітря

Санітарно-мікробіологічний контроль повітря

Повітря не є сприятливим середовищем для життєдіяльності мікроорганізмів. Однак, потрапляючи в повітря, багато мікроорганізми здатні якийсь час перебувати в життєздатному стані. Серед них велика

група патогенних і умовно-патогенних мікроорганізмів. Людина, яка хворіє інфекціями верхніх дихальних шляхів, виділяє мікроорганізми при розмові, чханні, кашлі і т.д. Через повітря передається група захворювань, яка так і називається - інфекції дихальних шляхів з повітряно-краплинним і повітряно-пиловим механізмами передачі. До таких інфекцій відносяться грип, кір, коклюш, скарлатина, дифтерія, натуральна віспа, легенева форма чуми, менінгіт, туберкульоз, вітряна віспа, паротит та інші.

Завданнями санітарно-мікробіологічного дослід-вання повітря є гігієнічна і епідеміолого-гическая оцінка повітряного середовища, і, як наслідок, розробка комплексу заходів, спрямованих на профілактику аерогенної передачі збудників інфекційних хвороб. Об'єктами санітарно-мікробіологічного дослідження повітря закритих приміщень є: повітря лікарень (операційні, відділення реанімації, пологові зали пологових будинків, і т.п.), дитячих садків, шкіл, поліклінік, аптек, виробничих цехів і допоміжних приміщень на підприємствах різного профілю (харчових, мікробного синтезу і т.п.), а також місць масового скупчення людей -кінотеатров, спортивних залів і т. д.

Останнім часом увагу санітарних мікробіологів привертають великі тваринницькі комплекси і птахофабрики. Так було показано, що в повітрі птахофабрик міститься велика кількість мікроорганізмів - до 8 млн в 1 м3, які, потрапляючи в атмосферне повітря, переносяться потоками повітря на великі відстані; серед них мікроорганізми pp Staphylococcus, Streptococcus, Clostridium, Bacillus, гриби роду Aspergillus і ін.

Санітарно-мікробіологічне дослідження атмосферного повітря у великих містах проводиться в плановому порядку і в деяких випадках за епідемічними показаннями. Дослідження атмосферного повітря в місцях зрошення землеробських полів стічними водами методом дощування проводиться з метою виявлення мікроорганізмів pp Salmonella, Escherichia.

При оцінці санітарного стану закритих приміщень в залежності від завдань дослідження визначається загальна бактеріальна забрудненість (загальне мікробне число), присутність санітарно-показових мікроорганізмів (стафілококів, а- і р -гемолитический стрептококів), а також безпосередньо патогенних мікроорганізмів (в залежності від характеру приміщень - мікобактерій туберкульозу, коринебактерій дифтерії, дріжджів і міцеліальних грибів та ін.). Наприклад, при дослідженні повітря медичних установ визначається присутність мікроорганізмів, що відносяться до умовно-патогенної флори (синьогнійна паличка, бактерії роду Proteus і ряд інших грамнегативних паличок), що викликають внутрішньолікарняні інфекції.

При дослідженні повітря на підприємствах харчового профілю, громадського харчування крім показника загальної обсіменіння визначають ті групи мікроорганізмів, які є характерними збудниками псування даних видів продукції або можуть зустрічатися в даному виробничому приміщенні (дріжджі і гриби - в холодильниках, стафілококи - в цеху виробництва морозива і т .п.).

На підприємствах мікробіологічної промисло-вості, де у виробництві використовуються актиноміцети, гриби, спороутворюючі бацили, дріжджоподібні гриби роду Candida та ін., Вивчається присутність і кількісний вміст в повітрі мікробів-продуцентів з метою попередження впливу їх на організм працюючих людей (можливість захворювання і розвитку сенсибілізації).

При вивченні присутності мікроорганізмів різних фізіологічних груп в повітрі використовують поживні середовища різного призначення (як стандартні, так і елективні або диференційно-діагностичні), в залежності від мети дослідження.

Методи відбору проб повітря і прилади

Санітарно-мікробіологічне дослідження повітря можна розділити на 4 етапи:

1) відбір проб;

2) обробка, транспортування, зберігання проб, отримання концентрату мікроорганізмів (якщо необхідно);
3) бактеріологічний посів, культивування мікроорганізмів;

4) ідентифікація виділеної культури.

Відбір проб, як і при дослідженні будь-якого об'єкта, є найбільш відповідальним. Правильне взяття проб гарантує точність дослідження. У закритих приміщеннях точки відбору проб встановлюються з розрахунку на кожні 20 м2 площі - одна проба повітря, по типу конверта: 4 точки по кутах кімнати (на відстані 0,5 м від стін) і 5-я точка - в центрі. Проби повітря забираються на висоті 1,6-1,8 м від підлоги - на рівні дихання в житлових приміщеннях. Проби необхідно відбирати днем ​​(в період активної діяльності людини), після вологого прибирання і провітрювання приміщення. Атмосферне повітря досліджують в житловій зоні на рівні 0,5-2 м від землі поблизу джерел забруднення, а також у зелених зонах (парки, сади і т.д.) для оцінки їх впливу на мікрофлору повітря.

Слід звернути увагу на те, що при відборі проб повітря в багатьох випадках відбувається посів його на живильне середовище.

Всі методи відбору проб повітря можна розділити на седиментаційних і аспіраційні.

Седиментаційних - найбільш старий метод, широко поширений завдяки простоті і доступності, проте є неточним. Метод запропонований Р. Кохом і полягає в здатності мікроорганізмів під дією сили тяжіння і під впливом руху повітря (разом з частинками пилу і крапельками аерозолю) осідати на поверхню живильного середовища в відкриті чашки Петрі. Чашки встановлюються в точках відбору на горизонтальній поверхні. При визначенні загальної мікробної обсіменіння чашки з мясопептонний агаром залишають відкритими на 5-10 хв або довше в залежності від ступеня передбачуваного бактеріального забруднення. Для виявлення санітарно-показових мікробів застосовують середу Гарро або Туржецкого (для виявлення стрептококів), молочно-сольовий або желточно-сольовий агар (для визначення стафілококів), суслоагар або середу Сабуро (для виявлення дріжджів і грибів). При визначенні санітарно показових мікроорганізмів чашки залишають відкритими протягом 40-60 хв.

Після закінчення експозиції всі чашки закривають, поміщають в термостат на добу для культивування при температурі, оптимальної для розвитку виділяється мікроорганізму, потім (якщо цього вимагають дослідження) на 48 ч залишають при кімнатній температурі для освіти пігменту пигментообразующих мікроорганізмами.

Новий метод має ряд недоліків: на поверхню середовища осідають тільки Грубодисперсні фракції аерозолю; нерідко колонії утворюються не з одиничною клітини, а з скупчення мікробів; на застосовуваних поживних середовищах виростає тільки частина повітряної мікрофлори. До того ж цей метод абсолютно непридатний при дослідженні бактеріальної забрудненості атмосферного повітря.

Більш досконалими методами є аспіраційні, засновані на примусовому осадженні мікроорганізмів з повітря на поверхню щільного поживного середовища або в уловлює рідина (м'ясо-пептони бульйон, буферний розчин, ізотонічний розчин хлориду натрію і ін.). У практиці санітарної служби при аспирационном взяття проб використовуються апарат Кротова, бактеріоуловітель Речменскій, прилад для відбору проб повітря (ПОВ-1), пробовідбірник аерозольний бактеріологічний (ПАБ-1), бактеріально-вірусний електропреціпітатор (БВЕП-1), прилад Киктенко, прилади Андерсена , Дьяконова, МБ і ін. Для дослідження атмосфери можуть бути використані і мембранні фільтри № 4, через які повітря просасивается за допомогою апарату Зейтца. Велика розмаїтість приладів свідчить про відсутність універсального апарату і про більшою чи меншою мірою їх недосконалості.

Прилад Кротова. В даний час цей прилад широко застосовується при дослідженні повітря закритих приміщень і є в лабораторіях СЕС.

Принцип роботи апарату Кротова (рис. 2) заснований на тому, що повітря, просасивается через клиноподібну щілину в кришці апарату, вдаряється об поверхню живильного середовища, при цьому частинки пилу і аерозолю прилипають до середовища, а разом з ними і мікроорганізми, що знаходяться в повітрі . Чашку Петрі з тонким шаром середовища зміцнюють на обертовому столику апарату, що забезпечує рівномірний розподіл бактерій на її поверхні. Працює апарат від електромережі. Після відбору проби з певною експозицією чашку виймають, закривають кришкою і поміщають на 48 ч в термостат. Зазвичай відбір проб проводять зі швидкістю 20-25 л / хв протягом 5 хв.

Таким чином, визначається флора в 100-125 л повітря. При виявленні санітарно-показових мікроорганізмів обсяг досліджуваного повітря збільшують до 250 л.

Приймач перед забором проби повітря заповнюється 3-5 мл уловлює рідини (водою, мясопептонний бульйоном, фізіологічним розчином хлориду натрію).

Прилад Речменскій працює за принципом пульверизатора: при проходженні повітря через вузький отвір воронки рідина з приймача через капіляр у вигляді крапельок піднімається в циліндр. Краплі рідини ще більше дробляться, б'ючись об скляну лопаточку і стінки судини, створюючи хмарку з дрібних крапельок, на яких і адсорбуються знаходяться в повітрі мікроорганізми. Насичені бактеріями краплі рідини стікають в приймач, а потім знову диспергують, що забезпечує максимальне уловлювання бактерій з повітря. При роботі прилад поміщають під кутом 15-25 °, що забезпечує стікання уловлює рідини в приймач. Швидкість відбору проб повітря через апарат Речменскій - 10-20 л / хв. Після закінчення роботи рідина з приймача забирають стерильною піпеткою і засівають (по 0,2 мл) на поверхню щільних поживних середовищ. Перевагою бактеріоуловітеля Речменскій є висока ефективність уловлювання бактеріальних аерозолів. Недоліки приладу полягають у труднощі його виготовлення, нестандартності одержуваних апаратів, їх великий крихкості і порівняно низьку продуктивність.

Великою перевагою є серійний випуск цього приладу (що дало можливість оснастити їм лабораторії СЕС), його портативність, більш висока продуктивність (20-25 л / хв). Колба приладу, в яку поміщається уловлює рідина, виготовляється з термостійкого плексигласу, капіляр з нержавіючої сталі. У колбу вмонтований пульверизатор, що викликає розпилення уловлює рідини при просасиваніі повітря. Такий пристрій дає можливість легко очищати і стерилізувати колбу з диспергирующим пристроєм простим кип'ятінням протягом 30 хв (автоклавирование неприпустимо, так як воно викликає деформацію циліндра).

Перед забором проб повітря в колбу вносять 5-10 мл уловлює рідини (найчастіше мясопептонний бульйон) і встановлюють її під кутом 10 °, що забезпечує природне стікання рідини після диспергування. Повітря, проходячи через колбу і пульверизатор, викликає утворення дрібних крапельок уловлює рідини, на яких осідають мікроорганізми. Прилад ПОВ-1 застосовується для дослідження повітря закритих приміщень на загальну мікробну забрудненість, для виявлення патогенних бактерій (наприклад, мікобактерій туберкульозу) і респіраторних вірусів в повітрі лікарняних палат.

Пробовідбірник аерозольний бактеріологічний (ПАБ-1). Механізм дії ПАБ-1 заснований на принципі електростатичного осадження частинок аерозолю (а отже, і мікроорганізмів) з повітря при проходженні його через прилад, в якому ці частинки отримують електричний заряд і осідають на електродах з протилежним знаком. На електродах для уловлювання аерозолів поміщають в горизонтальному положенні металеві піддони з твердими середовищами в чашках Петрі або рідким живильним середовищем (15-20 мл). Прилад переносний з великою продуктивністю 150-250 л / хв, тобто за 1 ч можна відібрати 5-6 м3 повітря. Його рекомендують застосовувати для дослідження великих обсягів повітря при виявленні умовно-патогенних і патогенних мікроорганізмів, наприклад, при виявленні в повітрі палат лікарень збудників внутрішньолікарняних інфекцій (Pseudomonas aeruginosa. Staph, aureus і ін.), Визначенні сальмонел і ешерихій в атмосферному повітрі в місцях дощування при зрошенні землеробських полів стічними водами.

Бактеріально-вірусний електропреціпітатор (БВЕП-

1). Прилад заснований на аспіраційно-іонізаційному принципі дії. БВЕП-1 складається з осаджувальної камери, в яку вмонтовано електроди: негативний у вигляді приводить трубки, через яку надходить повітря (і частинки аерозолю відповідно заряджаються негативно), і позитивний, на якому осідають бактерії.

Прилад МБ. Цей прилад служить не тільки для визначення загальної мікробної обсіменіння, але і для відбору проб повітря з аерозольними частками різних розмірів. Прилад МБ побудований за принципом «сита» і являє собою циліндр, розділений на 6 горизонтальних смуг, на кожну з яких поміщають чашки Петрі з МПА. Повітря просасивается, починаючи з верхнього ступеня, в пластині якої отвори найбільші, і чим нижче ступінь, тим менше розміром отвору (через останні проходять тільки тонкодисперсні фракції повітряного аерозолю). Прилад розрахований на уловлювання частинок аерозолю розміром більше 1 мкм при швидкості відбору повітря 30 л / хв. Зменшення числа отворів забезпечує більш рівномірний розподіл по живильному середовищі аерозолю з повітря. Для вловлювання ще більш дрібних частинок аерозолю можна додавати додатково фільтр з фільтруючого матеріалу АФА.

При використанні будь-якого з перерахованих приладів одержувані результати є приблизними, проте вони дають більш правильну оцінку обсіменіння повітря в порівнянні з седиментаційним методом. Оскільки і відбір і санітарно-мікробіологічні дослідження повітря не регламентовані ГОСТ, то можна використовувати будь-який прилад для оцінки бактеріальної забрудненості повітря. У багатьох випадках відбір проб суміщений з етапом посіву.

Для зниження чисельності мікроорганізмів в повітрі закритих приміщень застосовують такі засоби: а) хімічні - обробка озоном, двоокисом азоту, розпорошення молочної кислоти, б) механічні - пропускання повітря через спеціальні фільтри, в) фізичні - ультрафіолетове опромінення.

Визначення загальної чисельності сапрофітних бактерій

Загальна бактеріальна забрудненість повітря або мікробне число - це сумарна кількість мікроорганізмів, що містяться в 1 м3 повітря. Для визначення загальної кількості бактерій в повітрі закритих приміщень забирають дві проби (об'ємом по 100 л кожна) на чашки Петрі з МПА за допомогою будь-якого приладу (найчастіше апарату Кротова), або седиментаційним методом, розставляючи чашки з живильним середовищем за принципом конверта. Чашки з посівом поміщають в термостат на добу, а потім на 48 ч залишають при кімнатній температурі. Експозиція чашок з посівами на світлі дає можливість підрахувати окремо кількість пігментних колоній (жовтих, білих, рожевих, чорних, помаранчевих і ін.), Кількість спороутворюючих бацил, грибів і актиноміцетів.

Підраховують кількість колоній на обох чашках, обчислюють середнє арифметичне і роблять перерахунок на кількість мікроорганізмів в 1 м3 повітря. Бацили утворюють колонії, як правило, великі, круглі, з нерівними краями, сухі, зморшкуваті. Колонії грибів з пухнастим нальотом (місоги і Aspergillus) і щільні -зеленоватие або сіруваті (Penicillium). Актиноміцети утворюють білуваті колонії, врослі в агар. Кількість кожної групи колоній (пігментних, безпігментні, цвілі, бацил, актиноміцетів) висловлюють у відсотках по відношенню до загального числа.
При визначенні мікробного числа методом седиментації по Коху підраховуються колонії, що виросли на МПА в чашках Петрі, і розрахунок ведеться по B.J1. Омелянського. Якщо дотримуватися цієї методики, на чашку площею 100 см2 за 5 хв осідає таку кількість мікробів, яке міститься в 10 л повітря.
визначення стафілококів

Стафілококи є одним з найбільш поширених мікроорганізмів в повітрі закритих приміщень, що обумовлюється значною стійкістю їх до різних факторів навколишнього середовища. Виявлення патогенних стафілококів в повітрі закритих приміщень має санітарно-показове значення і свідчить про епідемічне неблагополуччя. Відбір проб повітря проводиться за допомогою апарату Кротова в кількості 250 л на 2-3 чашки з молочно-желточно-сольовим агаром (або молочно сольовим, желточно-сольовим) і на чашку з кров'яним агаром. Чашки інкубують при температурі 37 ° С протягом 48 ч. Вивчають культуральні ознаки всіх видів колоній (див. Додаток 3), з підозрілих готують мазки і фарбують по Граму.
Крім якісної характеристики окремих колоній, підраховують кількість колоній, що виросли стафілококів в 1 м3 повітря.

визначення стрептококів

Стрептококи також є санітарно-показовими мікроорганізмами повітря, в який вони потрапляють від хворих на скарлатину, тонзиліти, ангіною і носіїв стрептококів. Відбір проб повітря при дослідженні на наявність а- і р-гемолітичних стрептококів виробляють за допомогою апарату Кротова на чашки з кров'яним агаром, середовищами Гарро і Туржецкого. Забирають 200-250 л повітря, чашки з посівами витримують в термостаті 18-24 ч і потім ще 48 ч при кімнатній температурі (після попереднього перегляду та обліку). Ідентифікацію проводять за загальноприйнятою методикою (див. Додаток 3).

Визначення патогенних мікроорганізмів в повітрі

З огляду на малій концентрації патогенних мікроорганізмів в повітрі закритих приміщень, їх виділення є досить важким завданням.
При розшифровці внутрішньолікарняних інфекцій визначають в повітрі присутність стафілококів, стрептококів, синьогнійної палички, сальмонел, протея та ін. Відбір проб повітря проводять за допомогою ПАБ-1 в обсязі не менше 1000 л. Посів роблять на відповідні елективні середовища. Якщо використовується рідке середовище як уловлює рідина, то пробірку з рідиною поміщають в термостат на добу для підрощування (отримання накопичувальної культури), а потім висівають на елективну середу.
При дослідженні повітря на наявність мікобактерій туберкульозу відбір проб проводять за допомогою приладу ПОВ-1 в обсязі 250-500 л повітря. Як уловлює рідини беруть середу Школьникової, яку потім обробляють 3% розчином сірчаної кислоти (для придушення супутньої мікрофлори) і центрифугують. Осад засівають в пробірки на одну з яєчних середовищ, частіше середу Левенштейна - Єнсена. Інкубують при 37 ° С до 3 міс. Відсутність зростання протягом 3 міс дає можливість видати негативну відповідь. Пробірки перший раз переглядають через 3 тижні, потім кожні 10 днів. Виділену культуру ідентифікують, визначають її вірулентність (зараженням морських свинок - биопроба) і при необхідності визначають стійкість до лікарських препаратів.
При визначенні в повітрі коринебактерий дифтерії для посіву повітря використовують чашки з середовищем Клауберга.
В останні роки визначають в атмосферному повітрі в районах дощування землеробських полів, при зрошенні їх стічними водами, сальмонели в разі появи захворювання серед персоналу станцій зрошення або населення. Відбір проб проводять за допомогою апарату Кротова на чашки з вісмут- сульфітним агаром. Досліджують не менше 200 л повітря. Виділена культура ідентифікується за звичайною схемою визначення сальмонел.
У зв'язку з розвитком мікробіологічної промисловості виникла необхідність дослідження повітря з метою виявлення грибів-продуцентів при виробництві антибіотиків, ферментних препаратів, при виготовленні кормових дріжджів та ін. Для дослідження повітря на цвілеві гриби роду Candida відбір проб проводять за допомогою апарату Кротова в обсязі від 100 до 1000 л на чашки із середовищем Чапека, суслоагаром (для виявлення цвілевих грибів) і з метабісульфіт-натрій агаром (МБС-агар) з додаванням антибіотиків (для виявлення дріжджоподібних грибів роду Candida). Чашки інкубують в термостаті при температурі 26-27 ° С протягом 3-4 добу (для цвілевих грибів) і при 35-37 ° С протягом 2-3 добу (для грибів - продуцентів і дріжджоподібних роду Candida). Ідентифікація проводиться з урахуванням особливостей плодоносних гіф і характеру міцелію. Вважають, що концентрація дріжджоподібних грибів в кількості 500-600 клітин в 1 м3 повітря робочого приміщення є граничною, перевищення її веде до розвитку алергічних реакцій у робочих.

Додати коментар

Вашу адресу електронної пошти не буде опублікований. Обов'язкові поля позначені *