Методичні вказівки для курсу «Санітарна мікробіологія»

Методичні вказівки до лабораторного практикуму «Санітарно-мікробіологічний контроль на виробництві»,

Укладачі: Інешіна Є.Г., Гомбоева С. В.

Мета даних методичних указаній- сприяти розвитку і вдосконаленню практичних навичок у студентів при проведенні санітрано-мікробіологічної оцінки об'єктів (повітря, вода, грунт, обладнання, руки тощо). При цьому передбачається, що МУ будуть служити додатковим матеріалом при розгляді теоретичних питань з дисциплін «Санітарна мікробіологія», «Санітарно-мікробіологічний контроль на підприємствах».
МУ складаються з основної частини і додатків. В основній частині розглядаються загальноприйняті методи санітарно-мікробіологічного контролю повітря, води, грунту, обладнання, що дають повне уявлення про можливості контролю даних об'єктів з точки зору їх безпеки для здоров'я населення. Пропонуються завдання для виконання лабораторних робіт, що закріплюють методичний матеріал і дозволяють набути навичок по санітарно-мікробіологічній оцінці об'єктів зовнішнього середовища. Для контролю засвоєння кожної теми пропонуються питання для самоперевірки.

У додатках подано довідкові таблиці для санітарно мікробіологічної оцінки досліджуваних об'єктів (№1), назви і склад поживних середовищ для виділення і виявлення санітарно-показниьних мікроорганізмів (№2), основні характеристики різних груп мікроорганізмів, тести для проведення ідентифікації чистих культур мікроорганізмів (№3).

Ключові слова: мікроорганізми, кишкова паличка, методи виділення, аналіз води і грунту.

Вихідний рівень знань

1. Екологія мікроорганізмів, їх систематика.

2. Методи виділення мікроорганізмів з об'єктів навколишнього середовища: техніка посіву, культивування мікроорганізмів, оцінки отриманих результатів.

3. Методи вивчення морфологічних і біохімічних властивостей мікроорганізмів.

4. Фізіологічні властивості мікроорганізмів (вплив зовнішніх факторів, поживні середовища).

5. Патогенні мікроорганізми, фактори патогенності.

Література для самопідготовки

1. Богданов В.М. та ін. Технічна мікробіологія харчових продуктів / В.М. Богданов, Р.С. Баширова, К.А. Кірова та ін. - М .: харчПр-сть, 1968. - 743 с.

2. Мудрецова-Вісс К.А., Кудряшова А.А., Дедюхина В.П. Мікробіологія, санітарія і гігієна: навч.для вузів. 7-е изд. - М .: ВД «Ділова література», 2001. - 388 с.

3. санітарна мікробіологія / Н.В.Білетова, Р.П.Корнелаева, Л.Г.Кострікіна і ін. / Под ред. З.Я.Любашенко. - М .: Піщ.пр-сть, 1980. - 352 с.

4. Мармузова Л.В. Основи мікробіології, санітарії та гігієни в харчовій промисловості. - М .: ІРПО, Академія, 2000. - 132 с.

Вимоги до мікробіологічних лабораторіях

Лабораторні заняття з курсу «Санітарна мікробіологія», ряду курсів за вибором мікробіологічного напрямку проводяться в навчальній лабораторії, призначеної для підготовки і проведення різних мікробіологічних досліджень. Устаткування і техніка проведення робіт у навчальній лабораторії повинні відповідати вимогам, що пред'являються до виробничих та інших лабораторіях відповідного профілю.

До складу навчальної лабораторії входять: кімната для досліджень; автоклавна (стерилізаційна); мийна, обладнана для миття посуду; препараторська, де проводять підготовку лабораторного посуду і зберігають поживні середовища; матеріальна кімната - для зберігання запасів реактивів, посуду, апаратури, приладів, господарського інвентарю. Для проведення посівів, стерильною розливання середовищ і інших робіт з дотриманням правил асептики в приміщенні для досліджень влаштовують засклений бокс з передбокснику.

За кожним студентом в лабораторії закріплюють окреме робоче місце, на якому розміщують мікроскоп, іммерсійне масло. На столику для забарвлення розміщують штатив з бактеріологічною петлею і стерильною водою; пальник спиртову; набір фарбувальних розчинів і реактивів для фарбування препаратів мікроорганізмів; предметні і покривні скла; зливну чашку з містком для забарвлення мазків; промивалку з водопровідною водою і посудина з дезинфікуючим розчином; вату і фланелеві серветки; олівці по склу; годинник; сірники та ін.

Робочі столи повинні бути завжди чистими, а використовувані для роботи предмети - акуратно розкладені або розставлені по місцях.

Правила роботи, поведінки і техніка безпеки в мікробіологічній лабораторії

При роботі в навчальних лабораторіях необхідно враховувати те, що об'єктом дослідження є мікроорганізми, які при невмілому поводженні з ними можуть викликати хвороби у людини. У зв'язку з цим матеріали і культури мікроорганізмів, які використовуються для навчальних занять, повинні розглядатися як потенційно небезпечні. Тому що працюють в лабораторіях співробітники та студенти зобов'язані знати і дотримуватися правил, що забезпечують запобігання обсіменіння об'єктів зовнішнього середовища мікроорганізмами і особисту безпеку працюючого. На заняттях необхідно дотримуватися таких вимог:

працювати в лабораторії дозволяється тільки в спеціальному одязі - халаті, шапочці або косинці. Причому халат повинен бути застебнутий на всі гудзики, а волосся прибрані під головний убор. Виходити за межі лабораторії в спецодязі, виносити з лабораторії пробірки з культурами, препарати (мазки) та інші предмети категорично забороняється. У лабораторію не можна вносити сторонні речі. Книги, портфелі та інші необхідні для заняття предмети складають на окремий, спеціально відведений для цих цілей стіл;
в лабораторії забороняється палити, приймати їжу і воду;
студенти приступають до роботи тільки з дозволу викладача і всю роботу проводять в суворій відповідності з досліджуваної тематикою;
використані піпетки, предметні і покривні скла, шпателі, ватні тампони та інше поміщають в судини з дезинфікуючою рідиною (1% -ний розчин хлораміну та ін.). Пінцети, бактеріологічні петлі, препарувальні голки та інші дрібні металеві предмети після зіткнення з культурою стерилізують шляхом прожарювання в полум'ї пальника і тільки після цього поміщають в штатив або банку. Категорично забороняється залишати зазначені предмети нестерилізованими і розкиданими по столу;
відпрацьовані культури мікроорганізмів, а також інші забруднені матеріали і предмети за вказівкою лаборанта складають на спеціально відведений для цих цілей стіл або в спеціальні бюкси і потім стерилізують в автоклавах;

у випадках, коли культура мікроорганізмів потрапляє на стіл і інші предмети, необхідно за допомогою ватного тампона, змоченого дезрозчином, зібрати її, а забруднене місце ретельно обробити дезінф-цірующім розчином. При попаданні забрудненого культурою матеріалу на шкіру, кон'юнктиву або в рот вживає екстрених заходів. Про подію необхідно повідомити ведучому викладачу або лаборанту;

студенти не повинні включати електроприлади і апаратуру без контролю викладача або лаборанта. Не можна торкатися металевими та іншими предметами проводів і контактних частин електромережі.

кожен студент зобов'язаний дотримуватися охайність в роботі, тримати в чистоті робоче місце і обладнанняе;

після закінчення заняття студенти здають бактеріальні культури і всі матеріали викладачеві, під контролем прибирають робочі місця, після чого черговий здає аудиторію лаборанту;

перед відходом з лабораторії студенти знімають халати, руки обробляють дезинфікуючим розчином і ретельно їх миють.

З цими правилами студенти знайомляться на першому занятті, про що кожен з них розписується в спеціальному журналі з техніки безпеки.

Предмет і завдання санітарної мікробіології

Санітарна мікробіологія - наука, що вивчає мікрофлору навколишнього середовища (в тому числі патогенні бактерії і віруси), її життєдіяльність і викликаються в результаті цього процеси, які можуть безпосередньо чи опосередковано надавати несприятливий вплив на навколишнє середовище і здоров'я людей.

Початком розвитку санітарної мікробіології як науки прийнято вважати 1888 р, коли вперше французький лікар Є. Масі запропонував враховувати наявність кишкової палички в якості показника фекального забруднення води. Як наука, санітарна мікробіологія базується на основних положеннях мікробіології, гігієни та епідеміології, постійно розробляючи методи контролю за санітарним станом води, грунту, харчових продуктів і предметів побуту.

Результати досліджень в області санітарної мікробіології використовуються в першу чергу в профілактичної і лікувальної медицини, а також практично у всіх галузях народного господарства. У зв'язку з цим перед санітарної мікробіологією стоять наступні завдання:

розробка, вдосконалення методів дослідження об'єктів навколишнього середовища - води, повітря, грунту, харчових продуктів, предметів побуту і т.д. При цьому використовуються останні досягнення природничих наук;

оцінка шляхів впливу людини і тварин на навколишнє середовище. В результаті суспільної і індивідуальної діяльності людей відбувається контамінація об'єктів навколишнього середовища патогенними мікроорганізмами, при цьому особлива увага приділяється вивченню порушень процесів самоочищення води, грунту. Знання законів розвитку живої матерії біосфери дозволяє оцінювати можливості самоочищення об'єктів навколишнього середовища (грунту, води), створювати методи активного втручання людини в процеси, що відбуваються в природі, з метою її збереження і оздоровлення;

розробка нормативних документів, що визначають відповідність мікрофлори об'єктів навколишнього середовища гігієнічним вимогам, в тому числі характеристику за мікробіологічними показниками;

розробка рекомендацій і заходів по оздоровленню об'єктів навколишнього середовища, контроль за їх виконанням.

охорона навколишнього середовища. Це завдання є однією з головних, тому що на основі закономірностей взаємодії людини з факторами навколишнього середовища, розробляються науково обґрунтовані рекомендації по збереженню здоров'я людини.

Загальні поняття санітарної мікробіології

Патогенність - здатність мікроорганізмів викликати захворювання. Цей принцип є властивістю виду. наприклад, Corynebacterium diphtheriae (мікроорганізми, що викликають захворювання на дифтерію) вважаються патогенними для людини, проте окремі штами цього виду можуть сильно відрізнятися за ступенем патогенності (вірулентності). Отже, вірулентність - ознака штаму, а не виду. Тому можна говорити про високо-, Низько- і навіть авірулентние штамі певного виду. Вірулентність мікроорганізмів визначається двома факторами: інвазивністю, тобто здатністю розмножуватися в організмі господаря, і токсигенних, т.е. здатністю утворювати токсини - речовини, що ушкоджують органи (тканини) господаря. Деякі види патогенних мікроорганізмів ушкоджують макроорганизм за допомогою непрямого механізму, що вступає в дію за умови попереднього контакту з тим же збудником. Це явище називається підвищеною чутливістю, або алергією. В цьому випадку бере участь імунна реакція чутливого господаря на компонент клітини паразита.

Токсігенност'. Вперше це явище спостерігали дослідники в кінці XIX століття, працюючи з мікроорганізмами Clostridium tetani (збудник правця) і Corynebacterium дифтерії. Фільтрати, звільнені від клітин мікроорганізмів, вводили досвідченим тваринам. При розтині загиблих тварин виявлялися симптоми, характерні для відповідної інфекційної хвороби. Як з'ясувалося пізніше, не всі безклітинні фільтрати патогенних мікроорганізмів були токсичними, це дозволило припускати екзогенну і ендогенну природу бактеріальних токсинів.

Дослідження структури токсинів і їх локалізації стало можливим лише з розвитком хімічної і біологічної наук. Однак навіть в даний час ці дослідження часто бувають утруднені внаслідок відмінності умов і кінцевих результатів культивування клітин in vivo і in пробірці, А також зважаючи на складність підбору системи для культивування збудника тієї чи іншої хвороби. Наприклад, токсичні речовини збудників сибірської виразки (бацила сибірки) І чуми (Yersinia Pestis) - це комплекси двох або більше речовин, які не володіють токсичною дією як в ізольованому стані, так і поза організмом-господаря. Наприклад, токсин збудника холери (вібріон вібріон) Був виявлений тільки при введенні фільтратів культури в ізольовану петлю кишечника кролика.

Як правило, екзотоксини - речовини білкової природи, а ендотоксини - комплекси ліпополісахаридів з білками, що знаходяться в зовнішніх шарах клітинних стінок (для Грам (-) Мікроорганізмів).

Патогенні мікроорганізми потрапляють в навколишнє середовище з виділеннями хворих людей і тварин, носіїв відповідних інфекцій, а також з трупами загиблих від інфекційних захворювань. Патогенні мікроорганізми можуть передаватися від одного господаря іншому, цей процес називається інфекцієюi а при виникненні патологічного процесу - інфекційним захворюванням.

Хвороботворні мікроорганізми проникають в організм господаря різними шляхами:

з їжею або водою;

з зваженими в повітрі частинками пилу або вологи;

шляхом прямого контакту з хворим (носієм інфекції);

через укус будь-якого носія інфекції;

в результаті попадання на пошкоджені ділянки шкіри.

Безпосереднє виявлення збудників інфекційних хвороб в об'єктах довкілля (незважаючи на те, що в даний час розроблені методи прямого, прискореного і кількісного їх визначення) має цілий ряд труднощів. До них належать такі:

- патогенні мікроорганізми знаходяться в навколишньому середовищі не постійно - порівняно легко їх можна виявити в період епідемії тієї чи іншої інфекції, але дуже важко - в межепідеміческом періоди. Основна ж діяльність санітарних мікробіологів спрямована на попередження виникнення епідемій і тому вся робота ведеться в межепідеміческом періоди;

- концентрація патогенних мікроорганізмів у навколишньому середовищі значно поступається непатогенних і поширення їх в об'єктах нерівномірно;

- при виділенні патогенних мікроорганізмів методами культивування на поживні середовища, навіть інгібіторні, вони неминуче страждають від конкуренції сапрофитной флори.

У зв'язку з вищевикладеним очевидно, що отримуються негативні результати прямого визначення патогенних мікроорганізмів в об'єктах навколишнього середовища ще не говорять з достовірністю про їх відсутність.

В якості непрямих показників забруднення об'єктів навколишнього середовища використовують показники їх загальної обсіменіння (Кмафанм - кількість мезофільних аеробних і факультативно-анаеробних мікроорганізмів) і наявність в них мікроорганізмів-комменсалов (сапрофітних мікроорганізмів) ссавців. Мікроорганізми сапрофіти постійно мешкають в кишечнику або в верхньому відділі дихальних шляхів людини і тварин, багато з них відносяться до умовно-патогенної мікрофлори, тобто можуть проявляти свої патогенні властивості тільки при певних умовах. Такі мікроорганізми називаються санітарно показател'нимі.

Основні вимоги, що пред'являються до санітарно показовим мікроорганізмам, такі:

1) постійне проживання в природних порожнинах організму людини і тварин (які є їх єдиною природним середовищем проживання - біотопом) і виділення їх у великій кількості в навколишнє середовище;

2) тривалістьвиживання їх у навколишньому середовищі повинна бути такою ж або більшою, ніж патогенних мікроорганізмів, що виводяться з організму тими ж шляхами;

3) не повинні розмножуватися в довкіллі;

4) не повинні скільки-небудь істотно змінювати свої біологічні властивості при попаданні в навколишнє середовище;

5) повинні бути досить типовими, з тим, щоб їх диференціальна діагностика здійснювалася без особливих зусиль;

6) індикація, ідентифікація і кількісний облік повинні проводитися сучасними, простими, легко доступними та економічними мікробіологічними методами.

Знаходячи в досліджуваному матеріалі представників мікрофлори порожнини рота, роблять висновок про попадання слизу з дихальних шляхів, в якій можуть міститися і збудники дифтерії, скарлатини, туберкульозу та ін. Інфекційних хвороб дихальних шляхів. До сапрофітним мікроорганізмам слизових оболонок верхніх дихальних шляхів (що є санітарно-показовими

мікроорганізмами) відносяться зеленящий стрептокок Streptococcus viridans, гемолітичний стрептокок Streptococcus haemolyticus, в окремих випадках стафілокок - Стафілокок Пірролідонілпептідаза (стафілокок).

Виявляючи в об'єктах навколишнього середовища представників мікрофлори кишечника, роблять висновок про фекального забруднення і можливу небезпеку присутності черевнотифозних, дизентерійних паличок, сальмонел і ін.

збудників кишкових інфекцій. З постійних мешканців кишечника як санітарно-показових мікроорганізмів прийняті следующиє: БГКП (бактерії групи кишкових паличок), ентерококи (Enterococcus, Вул.фекальний, Вул.faecium), swlfïtredwcïrwyuşçïe анаеробна preïmwşçestvenno Clostridium perfringens, бактерії групи Proteus, кишкові бактеріофаги. Причому, санітарно показове значення бактеріофагів особливо зросла останнім часом у зв'язку зі спалахами вірусних захворювань, а в деяких країнах фагів тест є обов'язковим при санітарно-мікробівологический дослідженні води.

Додати коментар

Вашу адресу електронної пошти не буде опублікований. Обов'язкові поля позначені *