Принципи санітарно-мікробіологічних досліджень

Принципи санітарно-мікробіологічних досліджень

Принципи, якими керуються мікробіологи при санітарно-мікробіологічних дослідженнях, виходять з основного завдання, дозволеної ними: визначення можливості присутності в досліджуваному об'єкті патогенних мікроорганізмів або токсинів, що утворюються при їх життєдіяльності, а також виявлення та оцінка ступеня псування досліджуваного об'єкта (особливо харчових продуктів). Ці принципи можна охарактеризувати наступним чином:

1. Правильне взяття проб для санітарно-мікробіологічних досліджень з дотриманням всіх необхідних умов, регламентованих для кожного досліджуваного об'єкта, і правил стерильності. Помилки, допущені при взятті проб, призводять до отримання неправильних результатів, і виправити їх вже не можна. При упаковці і транспортуванні проб необхідно створювати такі умови, щоб не допустити загибелі або розмноження вихідної мікрофлори в досліджуваному об'єкті. Збереження матеріалу допускається тільки в умовах холодильника і не більше 6-8 ч. Кожна проба супроводжується документом, в якому вказують назву досліджуваного матеріалу, номер проби, час, місце взяття, характеристику об'єкта, підпис особи, яка взяла пробу.

2. Проводить серійні аналізів. Цей принцип виходить з особливостей досліджуваних об'єктів. Як правило, вода, грунт, повітря та інші об'єкти містять різноманітні мікроорганізми, розподіл яких нерівномірно, до того ж мікроорганізми, перебуваючи в биоценотических відносинах, піддаються взаємному впливу, що веде до загибелі одних і активного розмноження інших. Тому беруть серію проб з різних ділянок досліджуваного об'єкта, по можливості більшу кількість проб, що дозволить отримати більш достовірну характеристику об'єкта. Доставлені в лабораторію проби змішують, потім точно відміряють необхідну кількість матеріалу - середнє по відношенню до досліджуваного матеріалу в цілому.

3. Повторне взяття проб. Дана операція необхідна для отримання порівнянних результатів. Це пов'язано перш за все з тим, що досліджувані об'єкти дуже динамічні (вода, повітря і т.п.), змінюваність мікрофлори в них в часі і просторі дуже велика. Патогенні мікроорганізми потрапляють в навколишнє середовище, як правило, в невеликій кількості, до того ж і розподіляються в ній нерівномірно. Тому повторне взяття проб дозволяє більш точно визначити біологічну контамінацію об'єктів навколишнього середовища.

4. Застосування стандартних методів дослідження, затверджених відповідними ГОСТами та інструкціями, що дає можливість в різних лабораторіях отримувати порівнянні результати.

5. Використання одночасно комплексу тестів для отримання різнобічної санітарно-мікробіологічної характеристики. Застосовують прямий метод виявлення патогенних мікроорганізмів і непрямий, що дозволяє судити про забруднення об'єктів навколишнього середовища виділеннями людини і тварин і його ступеня. До непрямих тестів відноситься визначення загального мікробного числа, кількісного і якісного складу санітарно показових мікроорганізмів. Застосування непрямих методів оцінки потенційної можливості забруднення об'єктів навколишнього середовища патогенними мікроорганізмами, використання обхідного шляху для вивчення обсіменіння матеріалів, є особливістю санітарно мікробіологічних досліджень.

6. Проведення оцінки досліджуваних об'єктів за сукупністю отриманих результатів при використанні санітарно-мікробіологічних тестів з урахуванням інших гігієнічних показників, зазначених у відповідних ГОСТах і нормативах (органолептичних, хімічних, фізичних і т. Д.). Завжди необхідно враховувати, що розвиток мікробів тісно пов'язане з іншими факторами навколишнього середовища, які можуть надавати як сприятливий, так і несприятливий вплив, посилюючи або обмежуючи можливості розмноження патогенних мікроорганізмів і накопичення їх токсинів. Слід враховувати і те, що майже будь-який об'єкт дослідження має власну мікрофлору, яка викликає специфічні біохімічні процеси, і ті зміни в об'єктах, які обумовлені сторонніми мікроорганізмами. Грамотний мікробіолог повинен добре знати хід біохімічних процесів, що відбувається в нормі в досліджуваному об'єкті (грунт, вода), технологію виробництва, вміти визначити характер шкідливого впливу потрапили мікробів, можливі наслідки такого впливу і рекомендувати конкретні заходи щодо їх попередження.

7. Відповідальність фахівців за точність обґрунтування висновків і висновків про стан досліджуваних об'єктів. При санітарно-мікробіологічному дослідженні виявляється ступінь псування харчових продуктів (або інших об'єктів), придатність їх до вживання, можлива небезпека для здоров'я населення. Заборона використовувати харчові продукти, воду водоймищ тощо., Закриття підприємства через санітарний неблагополуччя завдають певної економічної шкоди. Відповідальність за таке рішення несе лікар санітарної служби.

З метою запобігання попадання і розвитку патогенних мікроорганізмів на харчові продукти на підприємствах харчової та переробної промисловості, громадського харчування постійно проводять санітарно мікробіологічний контроль всіх об'єктів, що контактують з продукцією - повітря, води, обладнання, тари, пакувальних матеріалів, рук обслуговуючого персоналу, а також безпосередніх джерел обсіменіння продукції - сировини, допоміжних матеріалів.

Загальна характеристика методів саіітаріо-мікробіологічних досліджень

При організації планового санітарно-мікробіологічного контролю на підприємствах харчового профілю використовують, перш за все, непрямі методи визначення присутності патогенних мікроорганізмів. При цьому для оцінки санітарного стану об'єктів навколишнього середовища використовують кількісні та якісні мікробіологічні показники.

Кількісні показники характеризують ступінь обсіменіння даного об'єкта мікроорганізмами, тобто загальне мікробне число в одиниці ваги (об'єму) - зазвичай в 1г (1см3). Існує два методи визначення мікробного обсіменіння: метод прямого підрахунку і метод кількісного посіву проб досліджуваного об'єкта або його розведень на поживні середовища.

Прямий підрахунок мікроорганізмів в досліджуваному об'єкті проводиться під мікроскопом в рахункових камерах Горяєва або в камерах, спеціально сконструйованих для рахунку бактерій. Попередньо пробу досліджуваного об'єкта піддають обробці, щоб отримати однорідну суспензію. Для кращого обліку бактерій в досліджувану суспензію додають барвник, найчастіше еритрозин. Можна проводити прямий підрахунок і на мембранних фільтрах, через які пропускають досліджувану рідину або суспензія.

Метод прямого підрахунку застосовується в екстрених випадках, коли необхідно терміново дати відповідь про кількісний вміст бактерій, наприклад, при аваріях в системі водопостачання, при оцінці ефективності роботи очисних споруд і т. П. Метод прямого підрахунку здається простим і зручним, проте він має ряд істотних недоліків, що знижують його цінність і через це досить рідко використовується. Істотним недоліком його є неможливість підрахувати бактерії, коли утворюються їх скупчення або коли вони «прилипають» до часток досліджуваного субстрату, не вдається підрахувати дрібні мікроорганізми, не кажучи вже про віруси. І нарешті, метод прямого підрахунку не дає можливості відрізнити живі мікроорганізми від загиблих. Створення автоматичних приладів для реєстрації загальної мікробної обсіменіння, таких як фотоелектричні і електронні лічильники, робить метод прямого підрахунку більш перспективним.

Метод кількісного посіву досліджуваного матеріалу на щільні поживні середовища застосовується найбільш часто. З приготованих серійних десятикратних розведень досліджуваної рідини або суспензії по 1 мл переносять у стерильні чашки Петрі (починаючи з більшого розведення, кожне розведення окремої піпеткою) і заливають розплавленим і охолодженим до 45-50 ° С мясопептонний агаром - МПА (глибинний посів). Для рівномірного змішування чашки злегка рухають по поверхні столу і після застигання агару поміщають в термостат.

Після інкубації підраховують число вирослих колоній і з урахуванням розведення вираховують число життєздатних мікробів в одиниці об'єму досліджуваного об'єкта. Якщо посіви вирощували при 30 ° С, то показником загальної обсіменіння досліджуваного матеріалу є Кмафанм (або МАФАМ). Кмафанм не визначають тільки у продуктів, при виробництві яких використовують заквашувальні культури. Залежно від виду продукту і способу його виробництва цей показник може свідчити про загальний санітарно- епідеміологічному стані продукту, свіжості або початковій стадії псування зовні доброякісного продукту, хоча в багатьох випадках метод вважається приблизними через неможливість виявити всі мікроорганізми в об'єкті на одній живильному середовищі , тому що їх фізіолого-біохімічні властивості різні. Крім того, режим інкубації також не відповідає вимогам всіх мікроорганізмів в асоціації, не дають зростання мікроби, що знаходяться в грудочках досліджуваного об'єкта, а якщо і спостерігається зростання колоній, то, можливо, не з однієї особини. Нарешті, частина мікроорганізмів втрачає здатність до розмноження в силу антагонізму, конкуренції та інших причин. Незважаючи на недоліки цього показника, для багатьох продуктів Кмафанм нормується.

В обов'язковому порядку контролюються санітарно показові мікроорганізми, які торік також є непрямим показником біологічної контамінації досліджуваного матеріалу патогенними мікроорганізмами. Перевищення нормативів за допустимим вмістом санітарно-показової мікрофлори свідчить про можливу присутність тих чи інших патогенних мікробів.

Для кількісної характеристики застосовуються дві групи методик: визначення титру та індексу.

Титр - це той найменший обсяг досліджуваного матеріалу (в мілілітрах) або вагова кількість (в грамах), в якому виявлено хоч одна особина санітарно-показового мікроорганізму. Наприклад, для визначення титру кишкової палички у воді засівають кілька різних обсягів (від 100 до 0,1 або до 0,01 мл залежно від передбачуваної ступеня забруднення об'єкту) в рідкі цукрові поживні середовища. Розмноження в них кишкових паличок реєструється за наявністю бродіння-розщеплення вуглеводу до кислоти і газу. Пересівши на щільні диференційно-діагностичні середовища і ідентифікація колоній, що виросли дозволяють з'ясувати ті обсяги, в яких присутня кишкова паличка. Потім за допомогою спеціальних таблиць, визначають до ли-титр. Набір таблиць входить в ГОСТ.

Індекс - кількість особин санітарно-показового мікроба, виявленого в певному обсязі (кількості) досліджуваного об'єкта. Для води, молока, інших рідких продуктів - в 1 л, для грунту, і харчових продуктів - в 1 р Індекс - величина, зворотна титру, тому перерахунок титру в індекс і назад можна проводити за формулою:

1000. 1000 (1)

титр = ----; індекс = ---

індекс титр

Відповідно для грунту і харчових продуктів:

титр = ----; індекс = ---. (2)

індекс титр

Індекс частіше визначають шляхом застосування мембранних фільтрів або посіву різних розведень досліджуваних субстратів на поживні середовища.

Вибір того чи іншого санітарно-показового мікроорганізму залежить від досліджуваного об'єкта і конкретного завдання. Відповідно говорять, наприклад, про титрі або індексі протея або маслянокисле бактерій і т.п. Нерідко (і в багатьох ГОСТах це узаконено) одночасно досліджується і ведеться кількісний облік двох або більше санітарно-показових мікроорганізмов.Качественние показники вказують на відсутність (наявність) мікробів конкретних видів в певній масі продукту.

Пряме виявлення в харчових продуктах патогенних або умовно-патогенних мікробів і їх отрут проводиться відповідно до існуючих нормативних документів. Зазвичай перевіряють наявність мікроорганізмів ppSalmonella, Staphylococcus, Cl.botulinum і їх токсинів, Cl.perfringens, Bac.cereus і ін. Відповідно до вимог ГОСТів патогенні мікроорганізми і їх токсини повинні бути відсутніми в певному обсязі (масі) матеріалу, що зазнає досліджень (25, 50 г і т.д.).

Санітарно-мікробіологічне дослідження об'єкта на присутність патогенних мікроорганізмів проводиться працівниками СЕС в плановому порядку, а також позапланово - за епідемічними показаннями. Для визначення патогенних мікроорганізмів можуть бути використані наступні методи:

• прямий посів досліджуваного матеріалу на поживні середовища;

• попередня концентрація патогенних мікроорганізмів пропусканням досліджуваного об'єкта (рідкої консистенції) через мембранні фільтри або посівом в середовища накопичення;

• виявлення патогенних мікроорганізмів методом зараження чутливих тварин (биопроба);

• застосування прискорених методів: серологічних, люмінесцентно-серологічних і радіоізотопного.

Для ілюстрації останньої групи методів нижче подано загальну характеристику прискорених методів дослідження води. Найбільше застосування отримав метод люмінесцентно-серологічний, який в даний час рекомендується для виявлення у воді мікроорганізмів
ppEscherichia, Salmonella, Shigella, Vibrio і ін. Метод імунофлюоресценції заснований на здатності антитіл, попередньо оброблених різними флюорохромами (флюоресцеіна изотиоцианат, родаміну сульфохлорид, родаміну сульфофторід і ін.), адсорбироваться на поверхні мікробної клітини і викликати її світіння. Метод флуоресцентних антитіл застосовується в трьох модифікаціях: прямий, непрямий і непрямий метод з додаванням комплементу. При прямому методе_капшо досліджуваної води, в якій передбачається наявність патогенних бактерій, поміщають на предметне скло, обробляють специфічної до шуканого мікроорганізму люминесцирующей сироваткою і спостерігають під люмінесцентним мікроскопом. На темному тлі препарату при позитивному результаті видно яскраву флюоресценція по периферії клітин.
При непрямому методі обробка препаратів відбувається в два етапи: специфічної імунної сироваткою виявляють присутність відповідних бактерій, на наступному етапі виявляють утворився комплекс обробкою міченої імунною сироваткою, що містить антитіла до глобулінів специфічної сироватки. Цей метод має суттєву перевагу перед прямим, так як для виявлення будь-яких бактерій використовується одна мічена сироватка проти антитіл - глобулінів, що містяться в специфічній сироватці (як правило, глобулінів кролика).

При непрямому методі з додаванням комплементу препарат обробляють в 3 етапи: спочатку специфічної до шуканого мікроби імунною сироваткою, потім - комплементом, який адсорбується на комплексі антиген - антитіло, і, нарешті, імунної протівокомплементарной флюоресцирующей сироваткою.

Для підвищення ефективності методу слід попередньо концентрувати бактерії в досліджуваній воді на мембранних фільтрах центрифугуванням або посівом в середовища збагачення. В цьому випадку люмінесцентно- серологічним методом вдається виявити ентеробактерії при наявності в пробах води навіть поодиноких клітин в 1 мл. Метод флуоресцентних антитіл рекомендується застосовувати при індикації в воді збудників туляремії, чуми, бацил сибірської виразки. Однак люмінесцентно-серологічний метод є тільки сигнальним методом індикації патогенних бактерій у воді, і при позитивному його результаті повинно проводитися ретельне бактеріологічне дослідження води.

Для прискореного виявлення БГКП у воді був запропонований радіоізотопний метод (Корш J1.E., 1978). Принцип методу полягає у визначенні кількості БГКП за кількістю метаболічної двоокису вуглецю, що виділяється при життєдіяльності бактерій з елективних середовищ, мічених 14С. Результат можна отримати через 5-6 ч.

Додати коментар

Вашу адресу електронної пошти не буде опублікований. Обов'язкові поля позначені *